在藥物分析活動(dòng)中為使測試結果準確可靠，必須對采用的分析方法的準確性、科學(xué)性和可行性進(jìn)行驗證，以充分表明分析方法符合測試項目的目的和要求，這就是我們通常所說(shuō)的要對分析方法進(jìn)行驗證。我們所使的檢驗方法理論上都應是經(jīng)過(guò)驗證和確認的，從法規的角度來(lái)說(shuō)，你在實(shí)驗室應用的無(wú)論是原料、輔料、中間體、成品，所有的分析方法都應該是經(jīng)過(guò)驗證的，是一個(gè)基本要求。

       哪些情況需要驗證分析方法呢，一般包括以下幾種情況，包括剛開(kāi)發(fā)的分析方法（建立新方法），修正或建立分析方法用于新的問(wèn)題，分析方法變更如相確定清潔驗證過(guò)程中對活性殘留的檢測方法，這種檢測方法一般都是由產(chǎn)品的含量檢測方法來(lái)轉化的，分析方法在不同實(shí)驗室和分析人員中使用，分析方法在不同的儀器是使用，證明兩個(gè)分析方法的等效性等。

       分析方法驗證的具體指標有那些：

       驗證的指標有準確度、精密度、專(zhuān)屬性、檢測限、定量限、線(xiàn)性范圍和內容性。

       下文解釋一系列名詞，準確度和精密度，準確度是指在真實(shí)值或認可的參考值與測量值之間的相近程度。

       精密度是指在規定條件下對均質(zhì)樣品多次取樣進(jìn)行的一系列的檢測結果的接近程度，精密度可以從重復性、中間精密度、重現性三個(gè)層次考察。

       在相同操作條件下較短的時(shí)間間隔的精密度稱(chēng)為重復性，實(shí)驗室內部條件改變等情況下的精密度稱(chēng)為中間精密度，不同實(shí)驗室之間的精密度稱(chēng)這重現性。

       專(zhuān)屬性是指在一些可能存在的組分如雜質(zhì)、降解物、基質(zhì)等對被分析物準確可靠測定的能力。像鑒別實(shí)驗、雜質(zhì)檢測和含量測定均需考察專(zhuān)屬性。

       檢測限是指樣品中被分析物質(zhì)能夠被檢測到的最低量，但不一定是準確定量。檢測限反映方法是否具備足夠的檢測靈敏度，常用的方法有直觀(guān)法，信噪比法、標準偏差和斜率法。 定量限是具有合適的準確性和精密度的條件下，能夠定量測定分析組分的最低限度，定量限體現分析方法是否具備靈敏的定量檢測能力，微量衡量藥物分析，定量測定雜質(zhì)和降解產(chǎn)物時(shí)就確定方法的定量限。

       線(xiàn)性是指在給定的范圍內檢測結果與樣品中被分析物質(zhì)的濃度成比例關(guān)系的能力，范圍是指達到一定的精密度、準確度和線(xiàn)性條件下測試方法適用的高低限濃度或量的區間。

       耐用性是指參數適當發(fā)生細小變化時(shí)測量能力保持不受影響，可用于說(shuō)明正常使用時(shí)的可靠性，用于為日常檢驗提依據的分析方法。典型的變動(dòng)因素有樣品提取次數和時(shí)間、被測溶液的穩定性，液相色譜的典型變動(dòng)包括流動(dòng)相組成pH、色譜柱、溫度、檢測波長(cháng)。

       分析方法驗證具體有哪些步驟？

       以圖片形式概括：

       新方法的驗證步驟包括開(kāi)發(fā)新方法，確定驗證方案確定實(shí)驗參數及及接受標準，驗證使用的儀器人員、試劑、運行驗證實(shí)驗。根據結果調整方法或接受標準運行，完成驗證實(shí)驗，建立該方法的SOP，確定日常工作中系統適應性試驗，最終完成完整的驗證報告。

       方法轉移

       我們在實(shí)際的工作中牽扯的方法轉移的情況是非常多的，比如說(shuō)最常見(jiàn)的我們方法研發(fā)的實(shí)驗室轉移到產(chǎn)品檢驗（QC）實(shí)驗室，這個(gè)也是一個(gè)方法的轉移，一個(gè)大的制藥集團從研發(fā)轉移到QC這也是一個(gè)轉移，這是不同的實(shí)驗室之間的轉移，方法接收的實(shí)驗室在使用這個(gè)方法。接收方法的實(shí)驗室就需要證明其能夠成功的在本實(shí)驗室中運行該方法，這也是方法轉移。

       還有一些轉移的情況，諸如由于生產(chǎn)線(xiàn)的轉移使分析方法從A生產(chǎn)地點(diǎn)轉移到了B生產(chǎn)地點(diǎn)。分析方法由MAH公司轉移到了合同加工公司。它的方法開(kāi)發(fā)了以后是一定要轉讓出去的。甲公司購買(mǎi)了乙公司的產(chǎn)品，方法由甲公司轉移到了乙公司。包括藥品的原料、輔料等。這些都會(huì )涉及到方法的轉移。

       目前對于很多的制藥企業(yè)來(lái)說(shuō)都建立了內部轉移的指導文件，也就是我們的方法轉移標準操作規程?，F在2020版的藥典有一個(gè)明確的指導原則，不用像以前一樣，要么是做的太多，要么是做的太少。

       分析方法轉移的概念包括三個(gè)要素，方法建立實(shí)驗室、方法接收的實(shí)驗室和比對性實(shí)驗。所謂的轉移就必須至少包括2 個(gè)實(shí)驗室，一個(gè)是方法建立的實(shí)驗室一個(gè)是方法接收的實(shí)驗室。方法建立的實(shí)驗室負責分析方法的建立和驗證，當其它實(shí)驗室需要按照以經(jīng)建立好的方法進(jìn)行檢驗時(shí)，這些實(shí)驗室統稱(chēng)為方法接收實(shí)驗室。

       方法接收實(shí)驗室需要證明其能夠成功的在本實(shí)驗室操作該方法，最常用的方法就是對比性測試。如果接收實(shí)驗室采用該方法對樣品測定的結果與方法建立實(shí)驗室測定結果符合相關(guān)的接受標準，證明方法接收實(shí)驗室能夠操作此方法，方法轉移證明是成功的。

       被測樣品的數量和方法的重要性、復雜性和接收實(shí)驗室此前是否有操作此類(lèi)方法的經(jīng)驗有關(guān)，所以在方法轉移之前，要注意確保方法接收實(shí)驗室工作人員對方法中涉及的關(guān)鍵參數有詳細的了解，很重要的一點(diǎn)是轉移程序對操作關(guān)鍵參數的說(shuō)明也要詳細。轉移程序還要明確雙方實(shí)驗室的職責，進(jìn)行一個(gè)良好的溝通，同時(shí)確定各種參數的可接收范圍。

       對比性測試中需要考慮的因素主要包括：

       1. 要提供若干批次的測試樣品（如2-5批）

       2. 被測樣品的濃度級別（1-3個(gè)濃度）

       3. 重復測定次數（4-6次）

       4. 分析時(shí)間（1-3天）

       5. 分析儀器（型號相同或者不同）

       如果我們是做新藥研發(fā)的，對于進(jìn)口藥品的注冊標準，藥監機構涉及方法轉移的一項重要工作就是進(jìn)口藥品的質(zhì)量標準的復核，進(jìn)口藥品的質(zhì)量復核，根據我國《藥品注冊管理辦法》的規定，當國外藥品申請在中國上市時(shí)，需要報送3批樣品在中食藥品檢定研究院或各口岸的檢驗機構進(jìn)行藥品質(zhì)量標準的復核，同時(shí)提交相應的分析方法，方法學(xué)驗證以及3批樣品的出場(chǎng)檢驗結果。這個(gè)就是一個(gè)最典型的方法轉移，我們在拿到質(zhì)量標準的時(shí)候，首先要查各國藥典美國、英國、歐洲、日本、中國藥典，看這個(gè)品種的收載情況，進(jìn)行方法的比較，限度的比較，并不是說(shuō)你提供的標準就要照著(zhù)做一遍就OK了，比如說(shuō)有關(guān)物質(zhì)，我們可能要做一個(gè)檢測限，含量對三批結果進(jìn)行一個(gè)比對，我們做出的三批與報告單進(jìn)行一個(gè)比較。針對具體企業(yè)間轉移的品種可能就更復雜一些。

       方法的確認

       在日常的檢驗工作中，經(jīng)常方法確認和方法轉移以及方法驗證這3個(gè)概念相混淆，尤其是方法確認，大家的理解各不相同，做法各異。方法確認的核心有三點(diǎn)，首先確認的是藥典的分析方法或法定的分析方法進(jìn)行確認，你建立一個(gè)新方法一定是法定的方法。第二證明藥典分析方法或法定的分析方法適用于被測樣品，被測樣品質(zhì)量可控，方法可行。第三證明方法的使用人員有能力成功的操作藥典分析方法或法定的分析方法。比如說(shuō)研發(fā)人員在對藥典的方法對研發(fā)的產(chǎn)品進(jìn)行檢驗的時(shí)候，不可能再進(jìn)行好多的驗證，我們是通過(guò)系統適應性試驗證明操作人員能夠成功的來(lái)操作藥典的分析方法。

       關(guān)于方法的確認，WHO、 ISO17025、 FDA 、USP發(fā)布的指導原則，國際上權威的機構的共同意見(jiàn)是，只要是方法確認。一定是藥典的分析方法或法定的分析方法，對于第二點(diǎn)和第三點(diǎn)來(lái)說(shuō)，WHO、 FDA 、USP的側重點(diǎn)就有所不同。

       WHO 在藥品質(zhì)量控制實(shí)驗室操作規范是明確指出，方法確認是證明一個(gè)藥典的分析方法或經(jīng)過(guò)驗證的法定分析方法適用于本次檢驗的過(guò)程。WHO的定義側重于強調第二點(diǎn)，證明藥典分析方法對產(chǎn)品的適用性。

       ISO17025 、FDA 、以及USP對分析方法確認的定義基本上可以總結為，檢驗室驗室和方法使用者應該證明其對藥典方法有充分的了解并且有能力重現藥典方法，可見(jiàn)ISO17025 、FDA 、以及USP對方法確認側重于第三點(diǎn)，強調檢測實(shí)驗室人員和檢驗人員操作藥典方法的能力。

       如果將WHO和FDA以及USP的定義結合起來(lái)，就是說(shuō)一個(gè)相對完整的方法確認是證明藥典分析方法或法定分析方法適用于被測樣品，被測樣品質(zhì)量可控，方法可行，同時(shí)還證明方法使用人員有能力成功操作藥典分析方法和法定分析方法。

       藥品分析實(shí)驗室在采用藥典分析方法或法定分析方法進(jìn)行檢驗時(shí)，不需要對分析方法進(jìn)行驗證，但需要對分析方法進(jìn)行確認，以證明承擔檢驗的實(shí)驗室能夠正確操作藥典方法。具體確認那些內容，則沒(méi)有明確的規定，應根據方法本身的特點(diǎn)和檢驗人員對方法操作的熟練程度由檢驗室自己確定。