引言

       模式識別受體（PRRs）是一類(lèi)先天免疫受體，是病原體相關(guān)分子模式（PAMP）的傳感器；同時(shí)PRRs還可以識別響應壓力或組織損傷而釋放的內源性分子，從而充當損傷相關(guān)分子模式（DAMP）的傳感器。Toll樣受體（TLR）是識別許多病原體衍生大分子的PRR，TLR激活導致轉錄因子核因子-κB（NF-κB）和干擾素調節因子（IRFs）的激活，分別產(chǎn)生促炎細胞因子和I型干擾素（IFNs）。

       TLRs是I型跨膜蛋白，由胞外結構域中的富含亮氨酸重復序列（LRR）、單個(gè)跨膜結構域和參與信號銜接分子募集的細胞質(zhì)Toll/IL-1受體（TIR）結構域組成。人類(lèi)表達10個(gè)功能性TLR（TLR1至TLR10），TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6位于細胞膜上，在那里它們識別病原體表面的分子成分。TLR3、TLR7、TLR8和TLR9存在于細胞內內涵體膜上，在那里它們介導核酸的識別。

       TLR形成異二聚體或同源二聚體作為觸發(fā)信號的手段，細胞外和內體TLR的外結構域序列都是同源的，這一特征與它們識別的配體的多樣性形成鮮明對比。配體區分的一種模式依賴(lài)于TLR外結構域中存在殘基的差異，然而氨基酸變異和異二聚體的形成只能為識別不同的TLR配體提供有限的支持。因此，必然存在另一種反映TLR配體組成復雜性和多樣性的機制，以確保正確的PAMP檢測和自我/非自我區分。

       特定的輔助蛋白或輔因子可以發(fā)揮這一作用：它們是TLR功能所必需的，它們與TLR或TLR配體相互作用，輔助TLR的激活。由于它們在TLR功能中的重要作用，靶向這些輔助蛋白可能有利于旨在操縱TLR激活用于治療應用的策略。

       一、細胞表明TLR的輔因子

       LBP

       LPS結合蛋白（LBP）是一種481個(gè)氨基酸的糖蛋白，與來(lái)源于革蘭氏陰性菌外膜的脂多糖（LPS）具有高親和力。在細胞對LPS的應答過(guò)程中，LBP主要起催化作用，即LBP將LPS單體從其多聚體中轉運到CD14，加速LPS與 CD14的結合，1個(gè)分子LBP可促使上百分子LPS與CD14結合，介導TLR4對LPS的反應性。

       此外，LBP還可以與脂磷壁酸（LTA）、肽聚糖和脂肽結合并將其轉移到CD14，這表明LBP不僅可以幫助TLR4的功能，還可以幫助TLR1、TLR2和TLR6的功能。因此，LBP介導了對來(lái)源于革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌的PAMP的先天免疫反應。

       MD2

       MD2是一種160個(gè)氨基酸的糖基化可溶性蛋白，與TLR4的細胞外結構域結合，它是體內TLR4依賴(lài)性L(fǎng)PS反應所必需的。TLR4-MD2的晶體結構顯示了MD2如何促進(jìn)TLR4的功能：LPS將其六條脂質(zhì)鏈中的五條埋入MD2的疏水口袋中，兩個(gè)MD2-LPS復合物對于橋接兩個(gè)TLR4分子至關(guān)重要。由于TLR4-MD2異二聚體中的兩個(gè)TLR4分子具有有限的直接相互作用，MD-2對于TLR4的配體結合和二聚化都是必不可少的。

       CD36

       CD36是在脂筏中發(fā)現的B型清道夫受體家族的雙跨膜糖蛋白。CD36與TLR2-TLR6異二聚體的功能有關(guān)，CD36增強了對某些TLR2-TLR6配體的免疫反應。在體內，CD36的缺乏會(huì )導致革蘭氏陽(yáng)性金黃色葡萄球菌感染的易感性增加。此外，CD36還通過(guò)TLR4-TLR6異二聚體的組裝介導對氧化低密度脂蛋白（oxLDL）和淀粉樣β纖維的炎癥反應。

       CD36如何介導TLR2-TLR6和TLR4-TLR6的功能尚不完全清楚，但CD36的C末端似乎起著(zhù)重要作用。酪氨酸激酶LYN與CD36之間的相互作用需要CD36的殘基460-463，抑制LYN激酶活性會(huì )損害CD36與TLR4-TLR6的結合，并阻斷NF-κB對oxLDL的激活。因此，將LYN募集到CD36的C末端對于形成功能性TLR4-TLR6-CD36信號復合物非常重要。

       CD14

       CD14是一種375個(gè)氨基酸的富含亮氨酸的糖蛋白，以可溶形式存在于血液中，或作為髓系細胞上的糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨定膜蛋白存在。CD14與多種TLR配體相互作用，增強其激活TLR的能力。重組CD14的直接結合研究表明，CD14具有結合多種微生物產(chǎn)物的不同尋常的能力，包括LPS、肽聚糖、Pam3CSK4、polyI:C和CpG DNA。

       CD14首先與TLR4介導的免疫反應有關(guān)，作為對LPS的反應，CD14是TRIF依賴(lài)性信號傳導所必需的，在低劑量下是MyD88依賴(lài)性信號轉導所必需的。CD14還增強了對內體TLR配體polyI:C、咪喹莫特和CpG DNA的免疫反應，CD14可能促進(jìn)核酸的普遍內化。

       CD14除了結合多種配體的能力，還介導了TNF的產(chǎn)生，以響應TLR2-TLR6配體MALP2、LTA、酵母聚糖A和Pam2CSK4，并參與了TLR介導的對各種病毒的免疫反應，CD14究竟如何參與這些過(guò)程仍有待確定，但和LPS和核酸類(lèi)似，CD14可能介導配體與幾種TLR的相互作用。

       TRIL

       TRIL是一種由811個(gè)氨基酸組成的I型跨膜蛋白，在其細胞外結構域中含有12個(gè)重復的富含亮氨酸序列。研究表明，TRIL介導TLR3和TLR4信號，但不介導TLR2或TLR9信號。TRIL與LPS、TLR3和TLR4免疫共沉淀，表明TRIL參與配體遞送。

       二、內體TLR的輔因子

       Granulin

       顆粒蛋白（Granulin）是一種富含半胱氨酸的糖基化多功能蛋白，可以與TLR9相互作用。添加外源性顆粒蛋白前體可增強RAW巨噬細胞對合成寡脫氧核苷酸CpG-B和CpG-C的TNF分泌。在Grn-/-小鼠中，CpG ODN與TLR9的結合受損，因此顆粒蛋白可能有助于CpG遞送到溶酶體隔室。這些結果表明，顆粒蛋白有助于CpG的遞送，以促進(jìn)TLR9反應。目前尚不清楚顆粒蛋白是否與表面受體相互作用，以及是什么決定了TLR9對CpG-B和CpG-C而不是CpG-a的反應增強。未來(lái)的研究應澄清這些問(wèn)題，并確定TLR9激活需要哪種形式的顆粒蛋白。

       HMGB1

       高遷移率族蛋白B1（HMGB1）家族的成員是與染色質(zhì)相關(guān)的核蛋白，參與DNA的轉錄調控。HMGB1是該家族中研究最多的成員，通過(guò)與其受體TLR2、TLR4和晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（RAGE）的相互作用介導促炎功能。

       HMGB蛋白可能是核酸先天免疫反應的普遍介質(zhì)。HMGB1結合DNA和RNA，以響應TLR3、TLR7和TLR9的激活，是I型IFN和促炎細胞因子產(chǎn)生所必需的。HMGB1首先被描述為T(mén)LR9輔因子，因為它能夠結合CpG DNA，與TLR9相互作用，并增強TLR9對CpG的內體遞送。外源性添加HMGB1可增強DC和巨噬細胞對CpG的IFN-α和促炎細胞因子的產(chǎn)生。IFN-α的分泌依賴(lài)于HMGB1與RAGE的相互作用，RAGE是TLR9的"被動(dòng)"受體輔因子。HMGB1是TLR9對CpG DNA反應所必需的，由于其結合DNA的能力，可能會(huì )加劇自身免疫性疾病。

       LL37

       LL37是TLR9輔因子，與pDCs中自身DNA向TLR9的遞送有關(guān)。LL37是一種長(cháng)37個(gè)氨基酸的兩親性肽，在絲氨酸蛋白酶切割其前體后被激活。LL37-DNA復合物對DNA酶的降解具有抗性，并被pDCs內化，定位于早期內體，從那里介導TLR9依賴(lài)性IFN-α的產(chǎn)生。目前沒(méi)有證據表明LL37和TLR9之間存在直接相互作用，這表明LL37在細胞損傷的情況下可能主要作為DNA遞送分子。LL37也被證明可以與自身RNA形成復合物，并將這些復合物遞送到pDCs，以產(chǎn)生TLR7和TLR8依賴(lài)的IFN。LL37在TLR驅動(dòng)的反應中對宿主防御是否重要仍有待確定。

       三、TLR的伴侶、轉運和加工因子

       Gp96和PRAT4A

       Gp96是介導蛋白質(zhì)折疊的HSP90家族伴侶的內質(zhì)網(wǎng)（ER）同源物。Gp96普遍表達，并作為專(zhuān)性可溶性同二聚體存在，每個(gè)單元由N端ATP結合結構域、高電荷中間結構域和C端二聚結構域組成。gp96的靶點(diǎn)數量有限，包括整合素、血小板糖蛋白復合物和TLR。TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR7和TLR9的功能需要gp96。gp96介導TLR的折疊和成熟，然而gp96究竟在哪個(gè)階段干預TLR折疊，以及如何干預的，尚不清楚。

       PRAT4A是一種普遍存在且高度保守的可溶性ER管腔蛋白。與gp96類(lèi)似，PRAT4A對ER中多種TLR的成熟很重要，PRAT4A和gp96協(xié)同工作，以確保TLR的正確折疊。

       UNC93B1

       UNC93B1是一種ER駐留糖蛋白，是內體TLR反應所必需的。研究表明，UNC93B1與TLR3、TLR7、TLR8、TLR9相互作用，內體TLR的跨膜結構域控制著(zhù)與UNC93B1的結合。核酸感應TLR必須通過(guò)其跨膜結構域與UNC93B1相互作用，以便UNC93B1可以介導其遞送到內溶酶體，在那里它們可以結合并響應各自的配體。

       AP3

       適配蛋白3（AP3）是TLR9運輸機制的必需成分。AP家族的成員是四聚體蛋白，它們介導分泌和內吞途徑中膜蛋白的選擇。AP3由四個(gè)亞基組成：δ、μ3A、β3A和σ3，負責將DNA/RNA招募到內體中，以輸送到溶酶體和溶酶體相關(guān)細胞器（LRO）。

       組織蛋白酶

       TLR9在到達內溶酶體隔室時(shí)進(jìn)行蛋白水解處理，也可能在具有低pH值和蛋白酶的早期內體中進(jìn)行。處理TLR的蛋白酶必須與TLR9相互作用，因此被認為是輔因子。組織蛋白酶K缺乏導致BMDC細胞因子對CpG的反應降低，表明組織蛋白酶與TLR9功能有關(guān)。組織蛋白酶B、組織蛋白酶L、組織蛋白酶S和組織蛋白酶F被鑒定為與B細胞系TLR9功能相關(guān)的因子。此外，單個(gè)組織蛋白酶的抑制劑未能完全抑制切割和TLR驅動(dòng)的反應，表明要獲得完整的TLR9活性，需要多種組織蛋白酶的活性。

       結語(yǔ)

       TLR受體可以識別差異很大的PAMP，但顯示出結構保守的外結構域。許多有助于配體區分和受體信號傳導的分子已經(jīng)被鑒定出來(lái)，這些分子顯示出不同的功能：輔因子、信號適配器以及TLR功能的調節因子。TLR特異性激活的最終結果必須來(lái)自這些介質(zhì)的組合，從而產(chǎn)生復雜的信號。

       由于它們對TLR功能的貢獻，對有助于激活TLR的輔因子的研究非常重要，有助于我們更好地理解控制先天性和適應性免疫的TLR途徑。盡管這些認識是否可以應用于設計新的療法尚無(wú)法衡量，但操縱TLR的其他手段仍然是一個(gè)非常理想的目標。

       參考資料：

       1.Accessory molecules for Toll-like receptors and their function. Nat Rev Immunol.2012 Feb 3;12(3):168-79