不同類(lèi)型抗體（單克隆、抗體片段、雙特異性等）因結構特性不同，其下游純化策略各有差異，涵蓋親和、離子交換等多種層析技術(shù)，同時(shí)需注意病毒清除、去內毒素等通用關(guān)鍵點(diǎn)。
抗體下游純化策略需根據抗體類(lèi)型及其結構特性進(jìn)行優(yōu)化。以下是常見(jiàn)抗體類(lèi)型的純化策略及關(guān)鍵技術(shù)點(diǎn)：
1.單克隆抗體（mAb）
特點(diǎn)：含Fc區，結構均一，IgG為主（如IgG1、IgG4）。
核心策略：
- Protein A/G親和層析：高效捕獲，結合Fc區，去除大部分宿主蛋白（HCP）和核酸。
- 注意：不同IgG亞型對Protein A結合力不同（如IgG3較弱），可能需要調整洗脫pH或改用Protein G。
- 低pH病毒滅活：親和層析后立即進(jìn)行，滅活潛在病毒。
- 離子交換層析（IEC）：
- 陽(yáng)離子交換（CEX）：結合模式下進(jìn)一步去除聚集體和電荷變體。
- 陰離子交換（AEX）：流穿模式下去除DNA、HCP和內毒素。
- 分子排阻層析（SEC）：精純步驟，去除聚集體，確保單體純度。
- 切向流過(guò)濾（TFF）：濃縮和緩沖液置換，為后續制劑準備。
2.抗體片段（Fab、scFv、單域抗體等）
特點(diǎn)：無(wú)Fc區，分子量小，穩定性可能較低。
核心策略：
- 親和標簽層析：如His標簽（金屬螯合層析）、Flag標簽或抗原親和層析。
- 離子交換層析：
- 利用片段表面電荷差異，優(yōu)化pH和鹽濃度實(shí)現分離（如Fab片段pI通常低于完整抗體）。
- 疏水相互作用層析（HIC）：針對疏水性差異純化，尤其在去除錯誤折疊片段時(shí)有效。
- 復合模式層析（MMC）：如Capto adhere，結合多種作用力提高分辨率。
- SEC或TFF：去除聚集體及緩沖液置換。
3.雙特異性抗體（BsAb）
特點(diǎn)：異源二聚體，易形成錯配或聚集。
核心策略：
- 親和層析組合：若含Fc區仍可用Protein A，但需結合其他方法分離正確配對雙抗。
- Capto L親和層析：特異性結合κ輕鏈，用于分離含不同輕鏈的雙抗。
- 離子交換層析：利用電荷差異分離異源二聚體與同源二聚體。
- pH梯度洗脫：優(yōu)化CEX洗脫條件以提高分辨率。
- SEC或AEX：去除聚集體和殘留錯配產(chǎn)物。
4.抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）
特點(diǎn)：抗體偶聯(lián)小分子毒素，需保持偶聯(lián)物穩定性。
核心策略：
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疏水層析（HIC）：分離不同藥物抗體比（DAR）的ADC，如苯基瓊脂糖填料。
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反相層析（RP-HPLC）：分析和小規模制備，去除未偶聯(lián)藥物。
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TFF：緩沖液置換并濃縮，避免有機溶劑影響穩定性。
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特異性去除步驟：如使用巰基柱捕獲未偶聯(lián)的毒素。
5.多克隆抗體（pAb）
特點(diǎn)：多種抗體混合物，靶向不同抗原表位。
核心策略：
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混合親和層析：Protein A/G/L組合，覆蓋更多Ig亞型。
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AEX流穿模式：去除酸性雜質(zhì)（如白蛋白）。
6.IgM/IgA等大分子抗體
特點(diǎn)：五聚體（IgM）或二聚體（IgA），分子量大，易聚集。
核心策略：
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凝膠過(guò)濾層析（SEC）：分離單體與多聚體。
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離子交換層析：高載量填料（如Fractogel）處理大分子。
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通用關(guān)鍵點(diǎn)
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病毒清除：低pH孵育、納米過(guò)濾（20 nm）、溶劑去污劑法。
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去內毒素：AEX流穿模式或專(zhuān)用吸附劑（如EndoTrap）。
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工藝強化：連續層析技術(shù)（如CaptureSMB）提高效率。
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分析支持：HPLC（SEC、IEX）、CE-SDS、質(zhì)譜監控關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）。
不同類(lèi)型抗體的純化需結合其理化特性靈活調整步驟順序和條件，同時(shí)兼顧工藝穩健性和合規性（如ICH Q5A病毒安全要求）。
肖女士
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