劉如謙教授先后開(kāi)發(fā)了兩種精準基因編輯工具——堿基編輯器（Base Editor）和先導編輯器（Prime Editor），相比CRISPR-Cas9，這兩種新型基因編輯工具不會(huì )產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂（DSB），被認為是更安全的新一代基因編輯工具。
限制堿基編輯和先導編輯應用的主要障礙是遞送，對于體內基因編輯，目前的標準遞送方式是使用病毒載體，然而，堿基編輯和先導編輯及其guide RNA超過(guò)了慢病毒（LV）和腺相關(guān)病毒（AAV）的載體容量限制。此外，這些病毒載體遞送后長(cháng)時(shí)間表達基因編輯器，從而增加脫靶編輯（off-target editing）以及旁觀(guān)者編輯（bystander editing）的風(fēng)險。病毒載體自身還可能帶來(lái)整合風(fēng)險。
因此，相比使用病毒載體遞送基因編輯工具進(jìn)行體內基因編輯，將基因編輯工具以核糖核蛋白（RNP）的形式遞送到體內進(jìn)行基因編輯更安全，然而，RNP的瞬時(shí)活性通常難以產(chǎn)生最佳基因編輯效果。
2024年11月28日，劉如謙團隊聯(lián)合加州大學(xué)歐文分校的研究人員在 Nature 子刊 Nature Biomedical Engineering 上發(fā)表了題為：Safer and efficient base editing and prime editing via ribonucleoproteins delivered through optimized lipid-nanoparticle formulations 的研究論文。
該研究通過(guò)優(yōu)化脂質(zhì)納米顆粒（LNP）配方以核糖核蛋白（RNP）的形式遞送堿基編輯器（Base Editor）和先導編輯（Prime Editor），實(shí)現了更安全、更高效的基因編輯。
Spark公司開(kāi)發(fā)的AAV基因療法Luxturna于2017年獲得美國FDA批準上市，通過(guò)AAV病毒載體遞送正確的RPE65基因治療Leber氏先天性黑蒙癥2型（LCA2），真實(shí)世界數據顯示，治療效果可持續7年甚至更久，這表明了使用AAV病毒載體遞送的轉基因可持續表達。
對于核糖核蛋白（RNP），將純化的蛋白質(zhì)（例如Cas9）與合成的guide RNA復合，從而無(wú)需轉錄和翻譯，可在細胞內最快速地啟動(dòng)基因編輯活性，且持續編輯的時(shí)間最短。
在這項最新研究中，研究團隊證實(shí)了細胞穿透肽（CPP，構建融合蛋白或作為輔料）可以提高遞送RNP的效率，并且封裝RNP的脂質(zhì)納米顆粒（LNP）可以?xún)?yōu)化以增強RNP的穩定性、遞送效率和基因編輯效力。
具體來(lái)說(shuō)，在篩選合適的可電離陽(yáng)離子脂質(zhì)并通過(guò)優(yōu)化合成脂質(zhì)DMG-PEG 2000的濃度后，研究團隊表明，使用可電離脂質(zhì)SM102，通過(guò)微流控混合，將腺嘌呤堿基編輯器（ABE）和先導編輯器（Prime Editor）以RNP形式封裝在LNP內，相比直接遞送裸RNP，可將體內基因編輯效率提高300倍以上，在遺傳性視網(wǎng)膜變性小鼠體內日，成功修復了Rpe65基因突變，顯示出了視覺(jué)功能的恢復，且沒(méi)有檢測到脫靶編輯。
總的來(lái)說(shuō)，該研究通過(guò)化學(xué)定義的LNP配方的優(yōu)化，提高了封裝RNP穩定性和遞送效率，從而產(chǎn)生了更安全的堿基編輯和先導編輯。
論文鏈接：https://www.nature.com/articles/s41551-024-01296-2
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