2020年10月22日，泛生子（納斯達克代碼：GTH）宣布與杭州艾沐蒽生物科技有限公司（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“艾沐蒽”）簽訂獨家許可協(xié)議，獲得其血液腫瘤微小殘留?。⊿eq-MRD）產(chǎn)品的全球獨家許可，并將加速產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和商業(yè)化。根據協(xié)議，泛生子將擁有使用艾沐蒽的Seq-MRD®技術(shù)進(jìn)行研發(fā)、注冊、商業(yè)化血癌MRD檢測產(chǎn)品的專(zhuān)有權。

       一、血液腫瘤發(fā)病背景簡(jiǎn)介

       血液腫瘤是一類(lèi)常見(jiàn)但復雜的癌癥類(lèi)型的統稱(chēng)，主要包括各類(lèi)白血病、多發(fā)性骨髓瘤以及惡性淋巴瘤，是一類(lèi)具有高度異質(zhì)性的疾病，對患者及其家庭都有巨大影響。以骨髓瘤為例，通過(guò)誘導化療等治療方案，可使得大約80%的成人患者達到臨床緩解。在這其中依然會(huì )有約72%的患者出現因免疫逃逸從而導致的疾病復發(fā)，骨髓移植后10-15年的生存率也僅保持在15%左右[1]。急性淋巴細胞白血?。ˋcute Lymphoblastic Leukemia, ALL）是成人最常見(jiàn)的急性白血病類(lèi)型，根據現行的系統性誘導化療方案，有85~90%的患者會(huì )出現臨床緩解，但這部分患者仍會(huì )存在60~70%的復發(fā)[2]。相比于兒童急性淋巴細胞白血病90%的存活率，成人急性淋巴細胞白血病的預后并不能令人滿(mǎn)意[3]。

       二、MRD在淋系血液腫瘤臨床診療中的應用

       微小殘留病變（Minimal Residue Disease，MRD）是指患者在接受治療后處于臨床緩解期，無(wú)臨床癥狀但在體內仍然存在腫瘤細胞的狀態(tài)。MRD狀態(tài)在實(shí)際中被用于指導治療[4]，根據是否適合骨髓移植[5]和預測復發(fā)情況[6]對患者進(jìn)行危險度分層。它還可用于指導臨床研究中的治療決策[7,8]。一項關(guān)于急淋白血?。ˋLL）的研究顯示，MRD陰性與無(wú)復發(fā)生存期延長(cháng)4倍，總生存期延長(cháng)3倍具有顯著(zhù)相關(guān)性[6]。加州大學(xué)舊金山分校的醫學(xué)博士Aaron Logon呼吁必須將治療轉向針對MRD的靶向和消除。MRD陽(yáng)性亦被美國FDA認可為具有臨床指導意義的指標，基于一項涉及706名成人多發(fā)性骨髓瘤（MM）患者國際研究結果，美國FDA最近批準了針對MM患者一線(xiàn)治療的CD38靶向單克隆抗體療法[9]。評估患者接受此治療前和治療后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的MRD水平，發(fā)現 MRD陰性與顯著(zhù)延長(cháng)的無(wú)進(jìn)展生存期相關(guān)[10]。血液惡性腫瘤的臨床實(shí)踐指南指出，MRD狀態(tài)是臨床結果和對治療反應的可靠指標，并且臨床結果與診斷為ALL和MM患者經(jīng)clonoSEQ Assay測量的MRD水平密切相關(guān)。在多發(fā)性骨髓瘤美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò )（NCCN）指南[11]，IMWG共識標準和ESMO骨髓瘤臨床實(shí)踐指南[12]中建議在每個(gè)治療階段后使用經(jīng)過(guò)驗證的分析方法進(jìn)行MRD評估；急淋白血病NCCN指南建議在完成初始誘導后對ALL成人患者進(jìn)行MRD檢測，MRD檢測的其他時(shí)間點(diǎn)應遵循所使用的治療方案。NCCN指南還建議使用MRD檢測來(lái)確定第一次或第二次完全緩解但MRD陽(yáng)性的患者，應使用blinatumomab治療[13]。

       一項Meta數據分析研究了14項已發(fā)表的研究成果，其中包括1273名MM患者，并量化了生存結果與MRD狀態(tài)之間的關(guān)系。發(fā)現MRD陰性與無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期相關(guān)。MRD檢測的預后價(jià)值的證據適用于所有疾病亞型、年齡、治療方案、檢測的治療階段和MRD檢測方法。MRD陰性與中位無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）相關(guān)，MRD陰性患者的PFS（54個(gè)月）超過(guò)MRD陽(yáng)性患者（26個(gè)月）兩倍時(shí)間[14]。

       三、MRD檢測技術(shù)方法對比

       MRD是在分子水平上對疾病狀態(tài)進(jìn)行檢測。在此之前，對血液腫瘤的復發(fā)檢測歷經(jīng)了傳統的形態(tài)學(xué)評估、流式細胞術(shù)、影像學(xué)評估以及分子生物學(xué)評估等階段。無(wú)論采用何種方式，在患者接受治療的過(guò)程中，都需要對患者的血液或骨髓樣本進(jìn)行檢測，了解其中腫瘤細胞的存在數量以及類(lèi)型。能夠識別出遠低于5%原始細胞閾值的殘留病變，是提高風(fēng)險分類(lèi)與預后的關(guān)鍵要素。在這樣狀態(tài)下殘存的腫瘤細胞數量很少，且沒(méi)有臨床癥狀，所以不易察覺(jué)，但腫瘤的復發(fā)也往往源于此，因此才需要有更加準確和靈敏的方法對MRD進(jìn)行檢測，從而獲知治療的效果和復發(fā)可能性。

       形態(tài)學(xué)評估是應用時(shí)間最長(cháng)的評估方式，已經(jīng)沿用了一個(gè)多世紀，但其靈敏度只能維持在約5%，即在每20個(gè)細胞中檢出1個(gè)白血病細胞[15]。起步于上世紀80年代的流式細胞術(shù)，大幅度的提高了MRD的檢測靈敏度。例如，通過(guò)使用熒光標記對多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)的細胞進(jìn)行表面標記，使其能夠被激光照射時(shí)得以被記錄而獲知其所占比例，與顯微鏡計數相比，流式細胞術(shù)的靈敏度可以提高到10-4~-5之間，即可在10,000-100,000個(gè)細胞中檢測到1個(gè)骨髓瘤細胞[16]，但受限于流式細胞儀的激光波長(cháng)種類(lèi)和可選的熒光標記，樣本的新鮮程度，以及操作人員經(jīng)驗與細胞類(lèi)型評價(jià)也具有較強的主觀(guān)性，使得其并不容易形成統一的臨床檢測標準。PET-CT是近年來(lái)新型的影像學(xué)診斷技術(shù)，其也可應用于骨髓瘤等血液腫瘤的影像學(xué)評估，并已被NCCN所接受[17]，但該技術(shù)的應用仍然面臨著(zhù)靈敏度低，對身體有輻射性且價(jià)格昂貴等問(wèn)題，無(wú)法成為臨床上廣泛應用的監測方法。隨著(zhù)分子生物學(xué)實(shí)驗技術(shù)的快速發(fā)展，其應用也逐漸擴展到了血液腫瘤相關(guān)領(lǐng)域。熒光定量實(shí)時(shí)PCR技術(shù)的不斷完善，使得其已經(jīng)在上世紀末被逐漸應用于MRD的檢測。根據其實(shí)驗原理，采用PCR技術(shù)的MRD檢測靈敏度可以達到10-5~-6，可在10-100萬(wàn)個(gè)細胞中檢測到1個(gè)骨髓瘤細胞[18]。但PCR技術(shù)只能檢測已知的序列突變，不能對未知的基因重組進(jìn)行檢測和定量白血病細胞的數量和來(lái)源，使其臨床應用也受到很大的局限。

       隨著(zhù)基因測序技術(shù)的不斷迭代，目前的二代測序技術(shù)（NGS）已經(jīng)可以用來(lái)對眾多腫瘤標志物panel進(jìn)行高通量檢測，其應用也逐步拓展到血液腫瘤。淋系白血病指的由淋巴系統細胞（主要為B細胞和T細胞）克隆性增殖導致的癌癥，因此可以通過(guò)對TCR和BCR測序特異性識別癌細胞。人體中的T細胞受體（TCR）是T細胞特異性識別和結合抗原肽MHC的分子結構。在組成TCR的α、β、γ、δ肽鏈中，β鏈中互補決定區3的多樣性使得T細胞能夠識別各種各樣的抗原。而這樣的多樣性是通過(guò)體細胞V（D）J基因重排產(chǎn)生的。由于V，D，J基因片段本身就具有多樣性，在重組過(guò)程中，在V-D和D-J的連接去還經(jīng)常有核苷酸隨機插入與缺失，這就進(jìn)一步增加了肽鏈的多樣性，TCR的總多樣性可高達1015，而在任一個(gè)人體內的多樣性通常為5000萬(wàn)種。B細胞受體（BCR）是由兩條重鏈（H）和兩條輕鏈（κ和λ）組成的四聚體，其中重鏈分為可變區（V區）、恒定區（C區）、跨膜區及胞質(zhì)區；輕鏈則只有V區和C區。V區由3個(gè)互補決定區（CDR1、CDR2和CDR3）組成，CDR的基因組成和排列順序呈現高度多樣性，在同一個(gè)體內，這種多樣性可高達109~12，從而構成容量巨大的BCR庫。對于血液腫瘤而言，NGS的優(yōu)勢正好可以匹配免疫系統中數百萬(wàn)甚至數億計各自不同的B/T細胞受體基因，從而對MRD進(jìn)行更加準確的定量[19]。NGS對于MRD的靈敏度一直保持在10-6左右，這使得可以對某些特征性的腫瘤細胞進(jìn)行靶向跟蹤，考慮到NGS技術(shù)的不斷平臺化，其檢測結果的穩定性也將大幅提高[20]。在2017/2018版《NCCN急性淋巴細胞白血病臨床實(shí)踐指南》、2017版《NCCN多發(fā)性骨髓瘤臨床實(shí)踐指南、》2016年版《中國成人急性淋巴細胞白血病診斷與治療指南》和2017年版《中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南》中均推薦可使用NGS進(jìn)行MRD檢測方法。

       四、美國MRD已獲批產(chǎn)品情況介紹

       2018年9月28日，FDA通過(guò)de novo 審批通道授予clonoSEQ 檢測和商業(yè)化許可，clonoSEQ 可使用骨髓樣本中的DNA檢測和監測多發(fā)性骨髓瘤（MM）和B細胞急性淋巴細胞性白血?。ˋLL）患者的最小殘留疾?。∕RD）。ClonoSEQ 對血液中的MRD（微小殘留白血?。O敏感，可以檢測到低每一百萬(wàn)個(gè)細胞中至1癌個(gè)細胞的水平。

       ClonoSEQ是第一個(gè)也是唯一一個(gè)FDA授權的用于MRD檢測的體外診斷測方法。同時(shí)也是第一個(gè)通過(guò)免疫測序技術(shù)獲得批準的臨床診斷工具。該檢測方法可對MRD進(jìn)行標準化、準確和靈敏的測量，從而使醫生能夠預測患者的預后，評估隨時(shí)間推移對治療的反應，在緩解期間監測患者情況并檢測潛在復發(fā)可能。

       FDA對三項之前進(jìn)行的臨床研究（一項273例急性淋巴細胞白血病，一項正在進(jìn)行的323例多發(fā)性骨髓瘤和一項706例多發(fā)性骨髓瘤）所得樣本進(jìn)行了回顧性分析評估，認可了該檢測的臨床有效性。對急性淋巴細胞白血病患者而言，clonoSEQ可用來(lái)評估在不同疾病負擔閾值下的MRD水平，從而顯示MRD水平與無(wú)事件生存相關(guān)---即患者在治療后沒(méi)有發(fā)生某些并發(fā)癥或事件的時(shí)間長(cháng)度。clonoSEQ檢測結果為MRD陰性患者的無(wú)事件生存率較長(cháng)，而MRD檢測結果較高的患者無(wú)事件生存率較低。對多發(fā)性骨髓瘤患者而言，clonoSEQ檢測給出了無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間與無(wú)疾病生存時(shí)間之間的相似關(guān)聯(lián)性。

       ClonoSEQ產(chǎn)品的成功，歸因于A(yíng)daptive公司的專(zhuān)有免疫測序平臺所積累的用于鑒定和定量惡性細胞的特定DNA序列的數據庫，以及檢測結果與臨床結果的關(guān)聯(lián)性的驗證。

       五、Seq-MRD®未來(lái)臨床應用潛力巨大

       中國血液腫瘤MRD的潛在市場(chǎng)非常廣闊，僅2017年，新增確診的淋系血液腫瘤患者約為13.5萬(wàn)人，其中NHL患者超過(guò)8萬(wàn)例，ALL和CLL患者約3.5萬(wàn)例， MM患者約2萬(wàn)例。假設新發(fā)患者平均每年檢測4次，每次價(jià)格3000元人民幣，則潛在市場(chǎng)規模將達16億人民幣。而存量患者的潛在市場(chǎng)則更大，據悉，淋系血液腫瘤存量患者人數為新增患者的2-4倍[22]。假設存量患者平均每年檢測2次，潛在市場(chǎng)規?？筛哌_16-32億人民幣。Seq-MRD有望成為這些患者的標準MRD檢測。

       泛生子與艾沐蒽此次合作推出的Seq-MRD®是基于二代高通量測序技術(shù)(NGS)，目前國內自主開(kāi)發(fā)的唯一一款血液腫瘤微小殘留病(MRD)檢測產(chǎn)品，靈敏性可達10-6，相比傳統的MRD檢測方法，Seq-MRD®檢測靈敏度提高10-100倍。在過(guò)去幾年中，Seq-MRD®已經(jīng)在國內完成數千例臨床樣本的驗證。Seq-MRD®可適用于對血液腫瘤，如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤等殘留腫瘤細胞的識別、評估與監控。輔助臨床醫生預測長(cháng)期療效、評估治療效果、監測緩解狀態(tài)以及檢測早期復發(fā)，從而為患者量身定制精準化的治療方案，以實(shí)現全階段癌癥管理，提高患者臨床療效并降低醫療成本。

       泛生子是中國的癌癥精準醫療公司，專(zhuān)注于癌癥基因組學(xué)研究和應用，并致力于依托先進(jìn)的分子生物學(xué)及大數據分析能力改變癌癥診療方式。致力于提供多應用場(chǎng)景的一站式分子診斷解決方案，包括癌癥早期篩查、診斷與監測以及藥物研發(fā)服務(wù)。

       艾沐蒽是中國適應性免疫系統研究前沿的生物科技公司，自主研發(fā)的免疫分析醫學(xué)平臺可揭示和翻譯適應性免疫系統的遺傳密碼，并致力于將其測序技術(shù)應用于癌癥、自身免疫性疾病、傳染性疾病等免疫介導性疾病的診斷和治療中。

       本次戰略整合將進(jìn)一步擴展泛生子在腫瘤診斷和監測領(lǐng)域的產(chǎn)品規劃與布局，實(shí)現臨床腫瘤患者不同檢測需求的全覆蓋，充分利用泛生子在精準醫學(xué)分子診斷領(lǐng)域的研發(fā)、注冊和商業(yè)化的優(yōu)勢，結合艾沐蒽的既往血癌產(chǎn)品及數據積累的優(yōu)勢。Seq-MRD®檢測產(chǎn)品能夠為目前血液腫瘤的患者提供更加精細化的臨床診斷和治療管理。據悉，泛生子計劃推動(dòng)Seq-MRD®檢測產(chǎn)品的注冊申報工作，獲批后將會(huì )為血液腫瘤患者提供更加精細化的臨床診斷和治療管理，使患者更快的從技術(shù)創(chuàng )新中獲益。

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