苦參是一種臨床常用的中藥材，具有燥濕、清熱、殺蟲(chóng)、祛風(fēng)、利尿等功效，苦參的入藥部分為根部，主要成分為苦參堿以及氧化苦參堿。氧化苦參堿具有利尿、抗病原體、免疫作用，有研究發(fā)現氧化苦參堿對肺癌、胃癌細胞誘導的血管內皮細胞增殖具有抑制作用，還有抗乙型肝炎病毒作用那么，氧化苦參堿檢測方法是什么？
由于目前臨床上的苦參產(chǎn)地各異，所以質(zhì)量也各不相同，為了更好的對苦參質(zhì)量進(jìn)行鑒別和管理，本文建立高效液相色譜法對中藥苦參藥材中的苦參堿和氧化苦參堿的含量進(jìn)行測定，并且對該實(shí)驗方法的精密度，重復性，穩定性等方面進(jìn)行實(shí)驗考察。
一、儀器與試藥：
（1）實(shí)驗儀器：高效液相色譜儀（LC-2010C），電子分析天平（92SM），超聲儀（5150A），色譜工作站。
（2）實(shí)驗試藥：中藥樣品苦參藥材（產(chǎn)地山西），苦參堿和氧化苦參堿的對照藥材（中國藥品生物制品檢定所），水（超純水）；色譜純乙腈；其他試劑均為分析純。
二、方法
（1）對照品溶液制備方法：精密稱(chēng)取苦參堿5.0mg和氧化苦參堿5.0mg，分別放置到5mL的容量瓶中，先加入適量的乙腈（80）-乙醇（10）-3%磷酸溶液（10）將其分別溶解，再稀釋至刻度線(xiàn)，搖勻即制備成了1.0mg每毫升的兩種對照品實(shí)驗溶液儲備液[3]。
（2）供試品溶液制備方法：取中藥樣品苦參藥材適量，使用剪刀盡量剪碎后精密稱(chēng)取51.00mg，再加入70%的乙醇溶液40mL，在90℃的溫水浴中進(jìn)行有效成分提取，每次2h，合并兩次提取液，過(guò)濾后，精密移取儲備液1mL通過(guò)2g，直徑為1cm的中性氧化鋁柱，再依次使用4mL三 氯 甲 烷和4mL三 氯 甲 烷（7）∶甲醇（3）進(jìn)行洗脫，收集實(shí)驗洗脫液回收溶劑后，再加入適量的乙醇溶液進(jìn)行溶解，轉移至25mL的容量瓶中加入乙醇稀釋至刻度即成供試品溶液儲備液，在進(jìn)樣前使用微孔濾膜進(jìn)行濾過(guò)。
（3）色譜條件設定：色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈（80）-乙醇（10）-3%磷酸溶液（10）；流速為（1.0mL/min）；檢測波長(cháng)（210nm）；進(jìn)樣量（每次進(jìn)樣10μL）；柱溫為（30℃）。
（4）線(xiàn)性關(guān)系考察：分別精密吸取苦參堿和氧化苦參堿兩種對照品儲備液溶液，使用流動(dòng)相進(jìn)行稀釋?zhuān)謩e制成0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μg/mL濃度的兩種對照品溶液。分別進(jìn)樣10μL進(jìn)行檢測，記錄色譜圖，以色譜峰面積做為縱坐標(Y)，以對照品溶液的濃度做為橫坐標(X)，分別進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得出回歸方程。
（5）精密度的實(shí)驗：分別取6份同一批次的苦參藥材樣品，按“供試品溶液制備方法”分別進(jìn)行制備，在“色譜條件設定”下，進(jìn)樣檢測，記錄測量出的色譜峰面積，平行測定苦參堿以及氧化苦參堿的含量。
（6）穩定性的實(shí)驗：分別取精密吸取同一批制備苦參藥材的供試品溶液10μL，分別在0.5h，1h，2h，4h，8h，12h，24h分別按“色譜設定條件”進(jìn)樣進(jìn)行測定，記錄分別測得的色譜峰面積。
（7）重復性的實(shí)驗：分別取同一批次制備的供試品溶液，重復按“色譜設定條件”進(jìn)樣6次測定，記錄色譜圖，考察重復性情況。
（8）加樣回收實(shí)驗：準確稱(chēng)取6份苦參藥材樣品，分別加入苦參堿和氧化苦參堿的對照品溶液，按“供試品溶液制備方法”分別制備，取各樣品溶液10μL進(jìn)樣檢測，記錄色譜圖，計算平均值，計算出回收率。
（9）樣品含量測定：取苦參藥材6份，按“供試品溶液制備方法”項下進(jìn)行供試品制備，分別“色譜條件設定”項下進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，計算苦參堿和氧化苦參堿的含量。
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